Иммуногистохимическое исследование - NiNa.Az

Иммуногистохими́ческое иссле́дование (ИГХ)— метод микроскопического исследования тканей, обеспечивающий наиболее специфическое выявление в них искомых веществ и основанный на обработке срезов маркированными специфическими антителами к выявляемому веществу, которое в данной ситуации служит антигеном. Впервые способ окрашивания клеточных и тканевых компонентов с помощью специфических антител для микроскопического исследования был предложен A. Coons и соавторами в 1941 году; позднее были разработаны антитела, помеченные не флуоресцентными красителями, а ферментами.

Хромогенная иммуногистохимия нормальной почки, направленная на белок CD10

Рис. 1. Схематическое изображение прямого иммуногистохимического метода

Рис. 2. Схематическое изображение непрямого иммуногистохимического метода

История метода

Предпосылки и первые основы ИГХ заложили работы Эмиля фон Беринга и Китасато Сибасабуро (1890) по лечению дифтерии и столбняка антитоксическими сыворотками, когда сложилось понимание специфичности антител. В 1897 году Пауль Эрлих предложил первую модель взаимодействия «антиген-антитело», где антитела описывались как рецепторы на клетках, специфично связывающие антигены по принципу «ключ-замок». Эта теория стала фундаментом для понимания специфичности иммунных реакций. Открытия Макса Грубера, Герберта Дархэма (1896) и Рудольфа Крауса (1897) позволили количественно изучать реакции «антиген-антитело», что позже легло в основу детектирования в ИГХ.

В 1940 году американский врач и патолог Альберт Кунс впервые применил флуоресцентные меченые антитела для визуализации антигенов в тканях. Но сложности с получением антител и плохая воспроизводимость результатов долго ограничивали применение метода.

В 1959 году был впервые применен метод иммуноэлектронной микроскопии, когда доктор Сингер для обнаружения вирусных поверхностных антигенов присоединил ферритин к антителам.

В 1966 году ученые Стратис Аврамеас и Пол Накане разработали иммунопероксидазные методы использования конъюгированных ферментами антител.

В 1969 году американские ученые Людвиг Штернбергер и Сэм Спайсер модифицировали протокол иммуноферментного анализа, используя реакцию «антиген-антитело», избежав таким образом химической конъюгации.

В 1970 году Людвиг Штернбергер изобрел пероксидаза-антипероксидазный метод (PAP), повысивший чувствительность ИГХ.

В 1971 году британские ученые У. Пейдж Фолк и Г. Малькольм Тейлор впервые применили коллоидное золото для ИГХ, что стало стандартом в электронной микроскопии. В 1978 году доктор Юрген Рот модифицировал метод с использованием конъюгата белка А с коллоидным золотом. С этого момента началось активное использование маркеров — конъюгатов коллоидного золота в медицине.

Прямой иммуногистохимический метод

Прямой иммуногистохимический метод основан на реакции специфического связывания маркированных антител непосредственно с выявляемым веществом (рис. 1).

Непрямой иммуногистохимический метод

Непрямой иммуногистохимический метод является более чувствительным, основан на том, что немаркированные первичные антитела связываются с искомым антигеном (выявляемым веществом), а далее уже их выявляют при помощи вторичных меченых антител, при этом первичные антитела служат для вторичных антигенами (рис. 2).

Способы маркировки антител

Маркировка антител производится путём их связывания с одной из следующих групп веществ:

• флуоресцентные красители (родамин, флуоресцеин);
• ферменты (щелочная фосфатаза, пероксидаза хрена) — далее выявляются гистохимически;
• электронно-плотные частицы (коллоидное золото, ферритин).

Практическое применение

• идентификация клеток различных типов по их уникальным маркерным признакам (имеет клиническое значение при дифференцировке гистологического типа опухолей молочной железы, щитовидной железы, лимфом и проч. опухолей; дифференцировке первичного очага опухолей при метастазировании);
• изучение синтетических и секреторных процессов;
• выявление гормонов и рецепторов к ним.

См. также

• Гистохимия
• Иммуноферментный анализ

Примечания

1. И.И. Бабиченко. НОВЫЕ МЕТОДЫ ИММУНОГИСТОХИМИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ ОПУХОЛЕВОГО РОСТА // Кафедра патологической анатомии Медицинский факультет Российский университет дружбы народов.
2. О. С. Киценко. К ИСТОРИИ ОТКРЫТИЯ И КЛИНИЧЕСКОГО ПРИМЕНЕНИЯ ПРОТИВОДИФТЕРИЙНОЙ СЫВОРОТКИ // ВОЛГОГРАДСКИЙ НАУЧНО-МЕДИЦИНСКИЙ ЖУРНАЛ : журнал. — Волгоградский государственный медицинский университет, кафедра истории и культурологии, 2015. — № 2. — ISSN 61(09):616.9-053.2(09) УДК 61(09):616.9-053.2(09).
3. ПАУЛЬ ЭРЛИХ (Paul Ehrlich). Исторические экскурсы // АЛЛЕРГОЛОГИЯ и ИММУНОЛОГИЯ в ПЕДИАТРИИ : журнал. — 2010. — № 3(22).
4. М.К.Мамедов. [https://cyberleninka.ru/article/n/immunohimiya-vekovoy-put-ot-reaktsii-agglyutinatsii-do-ligandnogo-immunoanaliza Иммунохимия: вековой путь от реакции агглютинации до лигандного иммуноанализа] // Биомедицина : журнал. — Баку: Hациональный центp онкологии, 2007. — № 3.
5. А.О. Иванцов, Д.Е. Мацко. ВОЗМОЖНОСТИ ИММУНОГИСТОХИМИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ В ДИАГНОСТИКЕ ОПУХОЛЕЙ // ПРАКТИЧЕСКАЯ ОНКОЛОГИЯ : журнал. — ФГБУ НИИ онкологии им. Н.Н. Петрова Минздравсоцразвития России, Санкт-Петербург, 2011. — Т. 12, № 4. — ISSN Р 56-47 ББК Р 56-47.
6. G. V. Childs. History of Immunohistochemistry // Pathobiology of Human Disease / Linda M. McManus, Richard N. Mitchell. — San Diego: Academic Press, 2014-01-01. — С. 3775–3796. — ISBN 978-0-12-386457-4.
7. Янин В.Л., Бондаренко О.М., Сазонова Н.А. [https://hmgma.ru/sveden/docs/uchebno-metod_aspir_issled%20gistolog%20ochn.pdf УЧЕБНО-МЕТОДИЧЕСКОЕ ПОСОБИЕ ДЛЯ АСПИРАНТОВ К ЗАНЯТИЯМ ПО ДИСЦИПЛИНЕ «МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ В ЦИТОЛОГИИ И ГИСТОЛОГИИ»]. — Ханты-Мансийск: БУ «Ханты-Мансийская государственная медицинская академия», 2015. — 65 с. — ISBN УДК 611-018.
8. Lev A. Dykman, Nikolay G. Khlebtsov. Methods for chemical synthesis of colloidal gold // Russian Chemical Reviews. — 2019-03-01. — Т. 88, вып. 3. — С. 229–247. — ISSN 0036-021X. — doi:10.1070/RCR4843.

Литература

• Быков В. Л. Цитология и общая гистология. — СПб.: СОТИС, 1999. — С. 18—19. — ISBN 5-85503-080-6.